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顯微圖庫 | 熒光壽命的成像圖庫

更新時間:2024-10-21      點(diǎn)擊次數(shù):85

使用 STELLARIS 共聚焦平臺進(jìn)行 TauSense 和 FLIM 分析

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共聚焦顯微鏡技術(shù)依賴于熒光探針的有效激發(fā)以及由熒光過程所發(fā)射的光子的高效收集。熒光特性之一是其發(fā)射波長(即熒光團(tuán)的光譜特征)。另一個更為強(qiáng)大但尚未充分探索的特性是熒光壽命(熒光團(tuán)在激發(fā)態(tài)的持續(xù)時間)?;跓晒鈮勖男畔⒃黾恿斯簿劢箤?shí)驗(yàn)的一個額外維度,能夠揭示熒光團(tuán)微環(huán)境的信息,并允許對光譜特性相重疊的物種進(jìn)行多重分析。



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利用STELLARIS共聚焦平臺進(jìn)行FLIM成像


本圖片庫展示了 TauSense 和熒光壽命成像(FLIM)在 STELLARIS 共聚焦平臺上的應(yīng)用。



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用四種紅色熒光蛋白標(biāo)記的秀麗隱桿線蟲神經(jīng)元的三維共聚焦圖像


使用STELLARIS 8 FALCON以單一激發(fā)線和單一探測器獲得了一幅標(biāo)記有四種紅色熒光蛋白的秀麗隱桿線蟲神經(jīng)元的三維共聚焦圖像。這四種不同的信號是通過相位分離技術(shù)獲得的。采用單一激光線和探測器不僅提升了實(shí)時成像的速度,也降低了所需的激光劑量。灰色表示僅強(qiáng)度信息,彩色表示合并后的相位分離信號。標(biāo)尺:20微米。通過FLIM在單一探測器上跟蹤4種不同的神經(jīng)元類型。

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用四種紅色熒光蛋白標(biāo)記的秀麗隱桿線蟲神經(jīng)元的三維共聚焦圖像




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小鼠胃干細(xì)胞衍生類器官的轉(zhuǎn)錄活動

                                                                                       


通過Hoechst 標(biāo)記細(xì)胞核。熒光壽命的差異反映了DNA壓縮程度的不同。較長的熒光壽命(紅色)對應(yīng)于具有更多開放閱讀框架和活躍DNA轉(zhuǎn)錄的細(xì)胞,如干細(xì)胞。該視頻采用多光子(DIVE)和熒光壽命(FALCON)技術(shù)進(jìn)行獲取。




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內(nèi)吞途徑和線粒體動力學(xué)

    
       

用 MitoView Green 標(biāo)記的線粒體。用 CellBright NIR750 標(biāo)記的膜泡。使用 TauSeparation,根據(jù)與囊泡內(nèi)吞成熟相關(guān)的 pH 值成熟步驟進(jìn)行壽命成分分離,揭示不同的內(nèi)吞步驟。




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使用 TauSeparation 在活細(xì)胞中進(jìn)行基于生命周期的多重分析

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用 MitoTracker Green、NucRed 和 SiR Tubulin 染色表達(dá) mNeonGreen-LifeAct 的 NE-115 活細(xì)胞。使用 2 個檢測器采集信號,每個檢測器檢測兩種熒光團(tuán)。強(qiáng)度圖像顯示為黃色和灰色。每個檢測器的信號是不同的




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利用多光子和熒光壽命成像技術(shù)探索葉綠體活性

              

多光子透射圖像展示了葉片結(jié)構(gòu),葉綠體的內(nèi)源性熒光顯示為綠色。接著,熒光壽命成像的相位分析指紋將這些內(nèi)源性熒光根據(jù)每個葉綠體的氧化潛力轉(zhuǎn)換為不同顏色。

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標(biāo)記有MitoTracker Green的表達(dá)LifeAct-GFP的哺乳動物細(xì)胞(由ibidi GmbH生產(chǎn))。采集由一個檢測器完成,分離由TauSeparation執(zhí)行。




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擬南芥的根-子葉交界處


大自然是多維的。為了真正理解其復(fù)雜性,我們需要從多個維度進(jìn)行觀察。這幅擬南芥根交界處的詳細(xì)多彩圖像僅需一次點(diǎn)擊和一個探測器即可獲取。若使用傳統(tǒng)共聚焦顯微技術(shù),則圖像將呈現(xiàn)為黑白。然而通過 STELLARIS,我們所見的一切都被熒光壽命信息這一額外維度所轉(zhuǎn)變。不僅肌動蛋白豐富的根系結(jié)構(gòu)得到了清晰展示,而且其與細(xì)胞壁和葉綠體之間的關(guān)系——這些結(jié)構(gòu)僅憑強(qiáng)度數(shù)據(jù)難以或無法區(qū)分——也得以明確。這不僅是大自然之美的縮影,更是一幅內(nèi)容豐富的圖像,推進(jìn)了我們對植物生物學(xué)的理解。

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擬南芥根-子葉交界處:肌動蛋白(Lifeact-Venus, Era 等人,植物細(xì)胞生理學(xué),2009),葉綠體(內(nèi)源熒光)和細(xì)胞壁(碘化丙啶)。使用基于熒光壽命的信息,肌動蛋白網(wǎng)絡(luò)、細(xì)胞壁和葉綠體的復(fù)雜細(xì)節(jié)清晰可見。圖像由 TauContrast 采集。樣品由海德堡大學(xué)植物科學(xué)中心的 Melanie Krebs 博士提供。




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STELLARIS共聚焦顯微鏡平臺


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