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如何通過激光顯微切割改善您的 DNA 突變分析工作流程

更新時間:2024-10-28      點擊次數:34

癌癥研究:提取未稀釋的癌組織進行DNA突變分析

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DNA 突變導致異常蛋白質或缺失功能蛋白質,這可能導致細胞不受控制地增殖并變得癌變。為了找到并理解特定癌癥類型的潛在突變,提取純腫瘤材料是極其重要的。這尤其具有挑戰(zhàn)性,特別是當只有有限數量的癌性組織可用時(例如小轉移)。激光顯微切割允許提取純粹的癌性組織,而不會用健康細胞污染您的樣本。DNA 測序將導致有效且可重復的結果,幫助輕松識別致癌的 DNA 突變,因為不會被污染的健康細胞掩蓋。




精確到單細胞的 DNA 變異分析工作流程


徠卡的激光顯微切割系統(tǒng)將通過精確切割您感興趣的細胞來改善您的工作流程。每一步都在視覺控制下進行,并且不會與周圍組織污染。





DNA 分析工作流程 - 步驟


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01.樣品準備

通常,激光顯微切割使用特殊的基于膜的載玻片。LMD的樣本準備是簡單的,可以從經典的組織學準備中得出。


石蠟包埋將組織樣本帶入可以切成薄片的狀態(tài)?;蛘?,您可以利用冷凍切片來準備您的載玻片。如果有新鮮的癌組織可用,您應該優(yōu)先選擇冷凍切片以保護核酸不被降解。


我們將為您的應用提供合適的LMD載玻片。




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02.固定和染色

一般來說,可以使用石蠟切片或冷凍切片。這里我們將概述冷凍切片的使用。


樣本切片應在冷凍切片后立即用丙酮、乙醇或乙醇和醋酸的混合物固定和染色。


H&E 是一種常見的組織學染色,其中蘇木精染色細胞核,伊紅染色細胞質。


H&E 染色適用于石蠟切片和冷凍切片。

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03.可視化和 ROI 定義

徠卡 LMD激光顯微切割系統(tǒng)可以生成自動樣本概覽,便于輕松導航到您的感興趣區(qū)域 (ROI)。


您的 ROI 可以通過 AVC 軟件模塊自動識別和標記,或者您可以手動應用形狀。

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04.激光顯微切割

接下來,定義的感興趣區(qū)域(ROIs)在視覺控制下被激光精確切割,并通過重力直接收集。視覺控制的切除可以防止腫瘤材料與健康細胞混合,從而扭曲結果。通過重力收集允許使用標準、經濟實惠的 耗材,如 PCR 管或 8 條管。


此外,您可以使用“移動和切割"工具直接在飛行中切割樣本,而無需任何預定義形狀。


我們提供適合您符合需求的LMD激光顯微切割系統(tǒng)。

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05.DNA提取

徠卡顯微系統(tǒng)推薦使用高質量的 QIAGEN 試劑盒(QIAamp® DNA Micro Kit)用于核酸的制備。


它們可以立即用于下游應用,如 PCR、測序、定量實時 PCR,或者可以在-20°C 下存儲,直到需要時使用。




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06.DNA突變分析

DNA 突變分析是通過下一代測序(NGS)進行的。


其他技術如焦磷酸測序或經典的 DNA 桑格測序也適用。

典型的研究領域


Pathology research 病理研究


Neuroscience 神經科學


Pharmaceutical research 制藥研究


Plant research 植物研究


Epigenetics research 表觀遺傳學研究


典型的研究領域


LMD 傳單 – DNA 突變分析


LMD 應用視頻


參考文獻:

1.Shen et al., Nature, 2018, doi: 10.1038/s41586-018-0703-0

2.Makohon-Moore et al., Nature, 2018, doi: 10.1038/s41586-018-0481-8

3.Untch et al., CancerRes, 2018, doi: 10.1158/0008-5472.CAN-17-1925

4.Huang et al. Nanotheranostics (2018)



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